2025年高考植物組織培養(yǎng)
來源:網(wǎng)絡(luò)整理 2024-11-19 15:36:25
1實驗室的準(zhǔn)備工作
本實驗需要作好三項實驗準(zhǔn)備:一是提前配制各種母液;二是提前準(zhǔn)備MS培養(yǎng)基;三是選擇外植體并進(jìn)行預(yù)處理。
1.1配制母液
母液中含有大量元素、微量元素、激素(植物生物調(diào)節(jié)劑)和維生素等有機成分,母液濃度是實際溶液濃度的5~10倍。配制母液花費時間多,需要用到溶量瓶、移液管等精密儀器,無法由每位學(xué)生親自操作,教師可帶領(lǐng)部分學(xué)生在課外進(jìn)行。母液的類型和配制順序如下:
配制母液的注意事項:⑴自來水或河水中含有大量的礦質(zhì)元素,勿用配制母液;⑵配制大量元素和微量元素母液時,應(yīng)將每種化合物單獨溶解后,再一一混合,同時還應(yīng)用適量的蒸餾水清洗燒杯內(nèi)壁,并將清洗后的蒸餾水倒入混合溶液中,這樣可以保證每種元素的濃度,混合時要按照教材附表中的順序進(jìn)行,最后加入的是氯化鈣溶液,這樣可以避免發(fā)生沉淀;⑶配制好的母液要先倒入1000ml燒杯中,再由燒杯轉(zhuǎn)入1000ml細(xì)口瓶中,不可由容量瓶直接倒入細(xì)口瓶中;⑷注意觀察母液中是否有絮狀物,出現(xiàn)絮狀物表明離子之間發(fā)生反應(yīng),需要重新配制母液;⑸植物生長調(diào)節(jié)劑難溶于水,需要堿或酸助溶,一般生長素類物質(zhì)用堿(0.1mol/LNaOH1~3ml)或酒精(75~95%的酒精1~3ml)助溶,細(xì)胞分裂素類物質(zhì)一般用酸(0.1mol/LHCL1~3ml)助溶,加入蒸餾水定溶時要緩慢,也可用水浴法助溶;⑹用棕色細(xì)口瓶盛裝有機物母液和植物生長調(diào)節(jié)劑母液,避免透射光損害母液中的有機成分;⑺在瓶壁上貼好各種母液的標(biāo)簽(下圖所示);⑻將配制好的母液放入冰箱中或陰涼處保存。
MS是穆拉希吉(Murashige)和斯庫克(Skoog)兩位科學(xué)家第一個字母的縮寫,他們于1962年為培養(yǎng)煙草而設(shè)計了一種培養(yǎng)基,這就是組培使用中最為廣泛的MS培養(yǎng)基;標(biāo)簽中間一行的數(shù)字及單位表示的意義如下,例如,100ml/L,即配制1升培養(yǎng)基只需從母液中提取100ml即可;50mg/100ml,表明100ml母液中含有50mg萘乙酸,如取4mg的萘乙酸,只需提取8ml母液。
除母液需提前配制好外,消毒液也需要提前配制好。外植體消毒一般采用75%的酒精、2~10%的次氯酸鈉溶液等。
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